隨著國內核酸檢測實驗室大量建立，每一輪疫情，PCR實驗室都承擔著巨量的 核酸檢測任務，伴隨著工作量的加大，實驗室的核酸污染也成了困擾實驗室工作人員的難題，核酸污染的后果就是容易出現假陽性，影響實驗數據和防疫工作。

實驗室的污染又分為：樣本間交叉污染，PCR試劑的污染，克隆質料的污 染，PCR擴增產物的污染，有沒有什么產品能夠在短時間內在不影響實驗室工 作的同時，又能完成對實驗室核酸污染的降解目的呢？

作為一名長期奮戰在檢測工作的一線人員，還有我的同行們，一直希望有一種真實的核酸氣溶膠污染解決方案，所以就有了下面的這個實驗，這個實驗方案我在網上也查找了一些相關資料，也同一些同行進行了交流，下面關于這個實驗方案的介紹，與大家共同分享：

第一部分

1.1 樣品

易護威牌核酸降解劑（配套核酸污染清除儀設備）

核酸清除設備：DAF-3000型, DAF-2000型，核酸降解劑型號：BRUMOXIM-2

進行核酸氣溶膠污染的空氣清除試驗。

（1）試驗艙的準備：開啟凈化10 min，調節溫、濕度值。溫度：20 ~ 30℃；濕度：45 ~ 55% RH。

（2）《GB27948-2020 空氣消毒劑通用要求》 ：使用氣溶膠噴霧消毒時，消毒劑用量應≤ 10 mL/m3。因此，將30 mL一定濃度的核酸降解劑加入到DAF-3000核酸污染清除儀中，將設備放入3 m³試驗艙中，連接電源并設置好噴霧程序，待用（依據產品實際運行情況操作）。

（3）試驗樣品的制備：在6支植絨棉簽上各加20 μL ASFV基因質粒標準物質，固定在EP管架上待其風干。

（4）將其中3支植絨棉簽放置在室溫下（不熏蒸）作為陽性對照，另3支植絨棉簽固定在EP管架上放入試驗艙中，關緊艙門。

（5）通過橡膠手套按下消毒噴霧設備的啟動鍵，待噴霧結束后開始計時。

（6）qPCR預混液的制備與分裝（地點：病毒室）

在1.5 mL去RNA酶EP管中制備包含除樣本外的所有qPCR反應組分的預混液，振蕩混勻后，用小型離心機離心5 s后分裝各13 μL到8聯管孔中（標準品單獨使用一列8聯管），蓋好備用。

（7）靜置密閉2 h后，通過傳遞艙將試驗組的3支植絨棉簽取出，開啟凈化30 min。

（8）將每只植絨棉簽在1.5 mL EP管中各自用1000 μL TE緩沖液進行洗脫，然后取200 μL進行核酸提取。

（9）進行Probe qPCR反應。

（10）等qPCR擴增反應完成后，記錄數據，比較熏蒸組與不熏蒸組之間的拷貝濃度，判斷核酸降解劑的核酸氣溶膠污染的空氣清除效果。

核酸氣溶膠污染的空氣清除效率 = （熏蒸前的質粒濃度 - 熏蒸后剩余質粒濃度）/ 熏蒸前的質粒濃度

最后得到的數據曲線圖為

最后得到的數據顯示，關于核酸降解這個問題，還是有辦法去解決的，然后根據相同的實驗過程，我們的核酸污染重災區生物安全柜的效果如何呢，我們又使用DAF-2000型在生物安全柜內進行整套實驗，取得的實驗效果也是一致的。

在整個實驗的過程中要感謝我的同事們，在過程中對我的協助，整個實驗一個人無法完成的，也要感謝（核酸清除設備和核酸降解劑的提供商）易護威環保科技（深圳）有限公司提供核酸降解儀及新上市的核酸降解劑，沒有這些，我們整個實驗是無法達到最佳的效果，也要感謝對實驗方案提供大量意見的我的同行們，希望對大家今后的檢測工作有幫助。

                                                                     本文作者：實驗室小兵